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不同粪便标本细菌的涂片检查

2016/08/10   来源:沈医检验

相信,很多人应该都知道,我们的胃肠道内存在着大量正常菌群。在这些细菌中,大部分为非致病的。当免疫力低下、使用大量抗生素时,造成肠道菌群失调。粪便直接涂片,主要观察细菌数量的增减与细菌种类及比例改变。通过涂片镜检可以协助诊断胃肠道疾病,如霍乱弧菌、艰难梭菌、假丝酵母菌等。


一、检验前处理


涂片制作与革兰染色:取新鲜送检粪便的水样、脓血或粘液样部分直接涂片或用无菌生理盐水制成悬液涂片,经自然干燥或烘片机烘干,进行革兰染色。


悬滴法或压滴法检查:取患者粪便,用无菌生理盐水制成悬液标本或压滴标本,直接用高倍镜检查细菌、真菌或寄生虫的形态或运动状况。


球杆菌比例涂片检查:取水样便或粘液便直接滴在洁净载玻片一端,以30~40°角度匀速推片,厚薄适宜,自然干燥后在酒精灯火焰上通过3次固定,进行革兰染色。


二、镜检与报告方式


(一)霍乱弧菌涂片检查


悬滴法检查:悬滴标本或压滴标本用高倍镜观察细菌,镜下呈穿梭状或鱼群状极活泼地运动,在悬滴涂片中加O1群霍乱弧菌诊断血清后,显微镜下观察,若原运动活泼的现象停止,为制动试验阳性,初步推断疑似“O1群霍乱弧菌”。


涂片染色检查:油镜观察有无革兰阴性杆菌,若见较小呈直杆状、弧形、香蕉状、逗点状或鱼群状等排列,报告为“找到革兰阴性弧形杆菌疑似霍乱弧菌”


(二)艰难梭菌涂片检查


取疑似抗生素伪膜性肠炎的患者粪便涂片,若发现革兰阳性粗大杆菌、无荚膜、大多形成卵圆形芽胞,位于菌体一端者,可报告“找到革兰阳性芽胞杆菌,疑似艰难梭菌”。


(三)葡萄球菌涂片检查


疑似葡萄球菌引起的食物中毒性的患者,取水样便或肠粘膜样物进行涂片,革兰染色后镜检,见到革兰阳性球菌呈单个、成双、葡萄状排列 。则报告为“疑似葡萄球菌”


(四)弯曲菌涂片检查


取粪便涂片,火焰固定后作革兰染色,若见革兰阴性弧菌、S形、螺旋形成海鸥状细菌则报告“疑似弯曲菌”;阴性则报告“未查见弯曲菌”。可作为初步报告。


(五)抗酸杆菌涂片检查


挑取蚕豆大粪块,直接将10毫升左右的4%氢氧化钠加入粪便中,振荡混匀,取上清5毫升左右,3000g离心15min,弃上清,加3滴1:15稀释血浆混匀,取20微升涂片,厚薄适宜,自然干燥后在酒精灯火焰上通过3次固定,进行抗酸染色。若找到红色杆菌,则报告“找到抗酸杆菌”;若整个涂片未找到红色杆菌,则报告为“未找到抗酸杆菌”。


(六)酵母样菌涂片检查


涂片检查:在载物玻片上加一滴生理盐水,用接种环挑取粪便与之混合,加盖玻片后,先用低倍镜然后再用高倍镜观察,可见卵圆形的芽生孢子及假菌丝,也可将涂片作革兰染色,见有革兰阳性芽生孢子及假菌丝即报告疑似酵母样菌。


三、结果解释


(一)粪便标本细菌涂片镜检,主要用于检查霍乱弧菌、弯曲菌、结核杆菌、真菌及疑似伪膜性肠炎的葡萄球菌、艰难梭菌等感染。


(二)涂片不要太厚,以免影响染色镜检效果。


(三)正常人粪便球杆菌比例范围一般约为1:10,不同年龄其比例不一样。长期使用广谱抗生素、免疫抑制剂及慢性消耗性疾病患者可发生肠道菌群失调,引起革兰阴性杆菌数量严重减少甚至消失,而葡萄球菌或真菌等明显增多,粪便中球菌/杆菌比值变大。


(四)找到革兰阴性弧形杆菌疑似霍乱弧菌应立即报告临床及医院行政管理部门,并作详细记录。


(五)在涂片查找艰难梭菌时,注意与蜡样芽孢杆菌镜下的区别:两者菌体大小相近,艰难梭菌芽胞为卵圆形,位于菌体次极端,蜡样芽孢杆菌芽孢圆形或柱形,中生或近中生。


(六)肠道寄生菌中的粪便酵母菌,属正常菌群。如粪便中检出酵母菌,尚不能作为诊断的直接依据。只有当抗生素使用过度,出现肠道菌群失调而继发腹泻时,粪便真菌涂片检查才具有临床诊断依据。


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